山东大学学报(医学版)

作者：曲忠花,迟令懿,马志勇,程振英,王旭平

单位：1.山东大学齐鲁医院络病理论创新转化全国重点实验室, 心血管重构和功能研究教育部和国家卫健委重点实验室, 山东 济南 250012;2.山东大学齐鲁医院神经外科, 山东 济南 250012;3.山东大学齐鲁医院眼科, 山东 济南 250012

关键词：视网膜色素上皮细胞,γ-氨基丁酸,γ-氨基丁酸能系统,缺氧,屏障功能,紧密连接蛋白,

基金：国家自然科学基金(81770796)

目的 探讨缺氧条件下γ-氨基丁酸(gama-aminobutyric acid, GABA)能系统在人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE)细胞中的作用及其机制,为防治缺氧相关视网膜疾病提供理论依据。 方法 分离并培养人RPE细胞,采用RT-PCR法、Western blotting法检测GABA相关分子［谷氨酸脱羧酶65/67(glutamic acid decarboxylase 65/67, GAD65/67)、γ-氨基丁酸转氨酶(GABA transaminase, GABA-T)、囊泡性GABA转运体(vesicular GABA transporter, VGAT)、GABA转运体1/2(GABA transporters 1/2, GAT-1/2)］的表达。利用免疫荧光技术检测人RPE细胞及人视网膜组织中GAD67、GABA-T和GAT-2的表达与定位。将RPE细胞暴露于缺氧环境中(1% O2,37 ℃,48 h),检测GAD67、GABA-T和GAT-2表达变化、单层细胞通透性和紧密连接蛋白(zonula occludens-1, ZO-1)水平。将细胞分为常氧空载体对照组、常氧基因过表达组、低氧空载体组以及低氧基因过表达组。通过腺病毒载体分别过表达GAD67、GABA-T或GAT-2,评估其对缺氧诱导的RPE细胞屏障功能损伤的影响。 结果 人RPE细胞表达GAD67、GABA-T和GAT-2,但未检测到GAD65、VGAT和GAT-1的表达。与常氧对照组相比,低氧组各基因蛋白GAD67［(17.54±6.89)%,t=2.595,P0.05,),但在加入外源 GABA 后, GAT-2过表达使得缺氧诱导下的RPE细胞通透性下降了(34.49±14.70)%(F=20.084, P<0.01)。此外,GAD67、GABA-T和GAT-2的过表达均未能逆转缺氧导致的ZO-1蛋白降低。 结论 人RPE细胞表达GABA能系统。在缺氧条件下,GABA能相关蛋白表达降低并伴随屏障功能损伤。增强GAD67、GABA-T表达可显著改善缺氧诱导的RPE细胞屏障功能异常,GAT-2过表达在补充外源GABA时亦有保护作用,提示GABA能系统可能成为改善缺氧相关视网膜疾病RPE屏障功能的潜在靶点。

来源：2025年第12期

《山东大学学报(医学版)》期刊编辑部

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