山东大学学报(医学版)

作者：刘晴晴,王宁宁,成军,周华君,车飞虎,孙青阳,王月,张英杰,戴玉柱

单位：1.蚌埠医学院检验医学院, 安徽 蚌埠 233000;2.中国人民解放军联勤保障部队第九〇三医院检验科, 浙江 杭州 310013

关键词：人腺病毒4型,重组酶介导等温扩增技术,Hexon基因,快速检测,分子诊断技术,

基金：浙江省自然科学基金(LGF20H200009);浙江省医药卫生科技规划项目(2019331539);杭州市医药卫生科技规划项目(OO20190415)

目的 基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)拟建立一种简单快速的人腺病毒4型(HAdV-4)检测方法。 方法 以HAdV-4的六邻体(Hexon)基因为靶标设计特异性引物与探针,利用构建的阳性质粒标准品,在39 ℃、40 ℃、42 ℃条件下进行重组酶介导等温扩增,选出最佳反应温度,并对该方法进行灵敏度、重复性及特异性检测。使用实时荧光RAA测定法检测100份临床样本,并与实时荧光PCR检测结果进行比较,评估HAdV-4实时荧光RAA测定法在临床样本中的检测性能。 结果 最终确定了实时荧光RAA扩增最适温度为42 ℃,该方法检测限为101 copies/μL。当质粒标准品浓度为101~104 copies/μL时,批内的变异系数均<5%,重复性良好。特异性检测结果显示,该方法可以准确检测HAdV-4而不与其他亚型和其他病原体发生交叉反应。100例临床样本分别使用实时荧光PCR和实时荧光RAA测定法进行检测,两种方法的符合率为100%。 结论 本研究开发了一种特异且简便的HAdV-4快速检测方法。

来源：2023年第10期

《山东大学学报(医学版)》期刊编辑部

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