山东大学学报(医学版)

作者：周云英,张通,钊倩倩,王海岩,汪运山

单位：1. 山东大学附属济南市中心医院医学实验诊断中心, 山东 济南 250013;2. 山东艾克韦生物技术有限公司, 山东 济南 250110;3. 山东第一医科大学附属中心医院临床基础研究中心, 山东 济南 250013

关键词：新型冠状病毒,低病毒载量,假阴性,灵敏度,特异性,

基金：国家自然科学基金(81802761);山东省2019重点研发计划(2019GSF107014);山东第一医科大学“学术提升计划”(2019QL024);新型冠状病毒肺炎防控应急科技公关计划(202001005-3)

目的 优化敏感性及特异性更高的新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒,提高阳性检出率。并与市售试剂盒进行对比,对临床使用提出指导。 方法 收集2020年1月至3月在山东大学附属济南市中心医院等6家2019-nCoV核酸检测单位的确诊患者88例及阴性患者572例,共计660例。通过对2019-nCoV的全基因组进行序列分析,设计更加灵敏的引物、探针,优化buffer配比及扩增过程。采用交叉实验及内源性物质干扰实验评价其特异性。另外选择3家市售核酸检测试剂盒,对梯度稀释的阳性核酸样本进行对比验证实验。 结果 优化后的开放读码框1a/b(ORF1ab)、核衣壳蛋白(N)对于2019-nCoV的RNA靶点,比市售试剂盒具有更高的灵敏度。当核酸样本中1个病毒浓度为1个拷贝时即可检出,同时扩增曲线更加优越。相比较与世界卫生组织(WHO)或自行设计引物的试剂盒,ORF1ab的灵敏度提高了2倍(1∶10 vs 1∶5);而N基因的灵敏度比中国疾病预防控制中心(CDC)和自行设计引物的试剂盒提高了8倍(1∶80 vs 1∶10),比WHO试剂盒提高了2倍(1∶80 vs 1∶40)。临床验证实验显示,鼻咽拭子检测准确度均为100%,与其他感染部位相同或感染症状相似的其他病原体无交叉反应,试剂盒的分析特异性为100%,阳性符合率和阴性符合率均为100%。 结论 优化后的2019-nCoV核酸检测试剂盒具有更高的检测灵敏度和特异性,有助于解决核酸检测假阴性,提高阳性率,将对低病毒载量患者及出院患者的判定具有重要的意义。

来源：2020年第10期

《山东大学学报(医学版)》期刊编辑部

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