山东大学学报(医学版)

作者：宋孟晓,王燕,刘进忠

单位：1.郑州大学第一附属医院口腔科, 河南 郑州 450052;2.山东大学口腔医学院·口腔医院特诊科, 山东 济南 250012;3.山东省口腔组织再生重点实验室, 山东 济南 250012;4.山东省口腔生物材料与组织再生工程实验室, 山东 济南 250012

关键词：miR-222-5p,根尖乳头干细胞,成骨/成牙本质向分化,SFRP4,Wnt信号通路,

目的 探讨miR-222-5p在人根尖乳头干细胞(SCAP)成骨/成牙本质向分化中的作用。 方法 选取芯片研究中差异表达的miRNAs 19个,采用qPCR验证SCAP成骨/成牙本质分化中以上miRNAs的表达;将19个miRNAs转染SCAP,成骨/成牙本质向诱导分化,qPCR检测DSPP、Runx2的表达,挑选表达量高的miR-222-5p组,Western blotting检测DSPP、Runx2蛋白水平的表达。生物信息学靶基因预测miR-222-5p的潜在靶基因,构建靶基因野生型/突变型双荧光素酶报告基因载体,与miR-222-5p共转染HEK 293T,双荧光素酶报告基因实验检测荧光素酶活性,证明miR-222-5p和预测的靶基因之间的关系。Western blotting验证 miR-222-5p转染SCAP后靶基因的表达。进一步研究抑制内源性miR-222-5p和干扰靶基因对SCAP成骨/成牙本质向分化的影响。 结果 19个miRNAs表达与芯片结果一致,其中miR-222-5p表达量高;转染miR-222-5p组DSPP、Runx2的mRNA及蛋白表达明显上调;生物信息学及双荧光素酶报告基因实验确认人分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)是miR-222-5p的直接靶基因,而且过表达miR-222-5p抑制SFRP4表达;干扰SFRP4可以有效地逆转miR-222-5p inhibitor对DSPP表达的抑制作用。 结论 miR-222-5p通过靶向调节SFRP4促进SCAP成骨/成牙本质向分化。

来源：2020年第3期

《山东大学学报(医学版)》期刊编辑部

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